人白介素1受體拮抗劑是一類藥物,用于干預免疫系統(tǒng)過度活躍引起的炎癥反應。它們通過阻斷人白介素1受體的結合作用,抑制白介素1信號通路的傳遞。白介素1(IL-1)是一種細胞因子,參與調(diào)節(jié)炎癥和免疫反應。當機體免疫系統(tǒng)異常激活時,過量的IL-1會導致炎癥反應過度增強,進而引發(fā)疾病如類風濕關節(jié)炎、炎癥性腸病等。
人白介素1受體拮抗劑通過與白介素1受體結合,阻斷IL-1的結合和信號傳遞,從而減輕炎癥反應。這些藥物可以減少炎癥細胞釋放的炎性介質(zhì),抑制炎癥基因的表達,并且還能改善相關癥狀。它們在治療自身免疫性疾病和其他與炎癥有關的疾病中發(fā)揮重要作用,例如類風濕關節(jié)炎、強直性脊柱炎等。
【白介素1受體拮抗劑洗滌方法】
1.自動洗板機:要求注入的洗滌液為350μl,注入與吸出間隔20-30秒。確保機器運用熟練后,再投入實驗中使用。
2.手工洗板:每孔加洗滌液350μl,靜置30秒后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干。手工洗板時,注意加入洗液的過程中,不要造成孔間污染,從而出現(xiàn)跳孔的現(xiàn)象。
【白介素1受體拮抗劑操作步驟】
從已平衡至室溫的密封袋中取出試驗所需板條,未用的板條和干燥劑請放回鋁箔袋內(nèi)封存于2-8℃。
預留空白孔(若使用雙波長讀板,空白孔可以不設)。
分別將標本或不同濃度人RANKL標準品(0pg/ml孔加標準品稀釋液)加入相應孔中(100μl/孔),用封板膠紙封住反應孔,37℃孵箱孵育90分鐘。
提前30分鐘制備生物化人RANKL抗體工作液。
洗板3次。
加入生物化人RANKL抗體工作液(100μl/孔)。用封板膠紙封住反應孔,37℃孵箱孵育60分鐘。
提前30分鐘制備酶結合物工作液。室溫避光放置。
洗板3次。
除空白孔外,加入酶結合物工作液(100μl/孔)。用封板膠紙封住反應孔,37℃孵箱,避光孵育30分鐘。
洗板5次。
加入TMB顯色工作液(包括空白孔)100μl/孔,37℃孵箱,避光孵育,當標準曲線高濃度的顏色較深,有明顯的顏色梯度的時候,即可終止。試驗顯色反應請勿超過30分鐘。
加入終止液(包括空白孔)100μl/孔,混勻后即刻測量OD(450nm)值(10分鐘內(nèi))。
【結果判斷】
1.每個標準品和標本的OD值應減去零孔的OD值。(若不減零孔值,標準曲線的零孔應相交于Y軸)
2.手工繪制標準曲線。以標準品濃度作橫坐標,OD值作縱坐標,以平滑線連接各標準品的坐標點。通過標本的OD值可在標準曲線上查出其濃度。使用專業(yè)制作曲線軟件進行分析,如curve expert 1.3進行結果計算。
3.若標本OD值高于標準曲線上限,應適當稀釋后重測,計算濃度時應乘以稀釋倍數(shù)。
注意:本圖僅供參考,應以同次試驗標準品所繪標準曲線來計算標本含量。
【操作程序總結】
準備試劑,樣品和標準品