可根據(jù)標(biāo)本的實(shí)際情況,做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議做預(yù)實(shí)驗(yàn),以確定稀釋倍數(shù)) 。
6.收集標(biāo)本,盡量做到雙份的用量,避免一次實(shí)驗(yàn)失敗,重復(fù)實(shí)驗(yàn)時(shí)標(biāo)本缺失,從而耽誤實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。
7.收集標(biāo)本時(shí),應(yīng)該做好防護(hù)措施(比如戴手套,口罩,護(hù)目鏡等),認(rèn)為所有標(biāo)本都具有一定的潛在危險(xiǎn)性。
8.樣本處理應(yīng)該在生物安全柜里面,并且正確使用生物安全柜。
【標(biāo)本處理辦法】
1.血清:將采集的全血靜置冰箱4℃過夜,然后1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時(shí)不測可以放入-20℃(1-3個(gè)月)或-80℃(3-6個(gè)月)保存。
2.血漿:用EDTA,枸櫞酸鈉,肝素等作為抗凝劑,加入血液混勻后,1000-3000rpm離
心10分鐘,取上清立即測試,暫時(shí)不測可以放入-20℃(1-3個(gè)月)或-80℃(3-6個(gè)月)
保存。
3.組織勻漿:切取組織塊,0.01MPBS中過洗一次;按照1G組織加入5-10ml組織蛋白萃取試劑的比例,在冰水中勻漿。勻漿完成后,5000-10000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時(shí)不測可以放入-20℃(1-3個(gè)月)或-80℃(3-6個(gè)月)保存。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時(shí)不測可以放入-20℃(1-3個(gè)月)或-80℃(3-6個(gè)月)保存。
5.尿液,腹水,腦脊液等:1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時(shí)不測可以放入-20℃(1-3個(gè)月)或-80℃3-6個(gè)月)保存。
注:樣品稀釋的一般原則
用戶須查閱相關(guān)文獻(xiàn)了解標(biāo)本內(nèi)待測因子的含量,決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù),以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA試劑盒的 檢測范圍。樣品的稀釋應(yīng)有詳細(xì)記錄。
【注意事項(xiàng)】
1.試劑盒使用前請(qǐng)保存在2-8℃。除復(fù)溶后的標(biāo)準(zhǔn)品,其他成分不可凍結(jié)。
2.濃縮生物素化大鼠β-TPS抗體,濃縮酶結(jié)合物體積小,運(yùn)輸中顛簸和可能的倒置,會(huì)使液體沾到管壁或瓶蓋。因此使用前請(qǐng)用手甩幾下或1000rpm離心1分鐘,以使附著管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。
3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,使結(jié)晶*溶解后再配制洗滌液。
4.測試過程中,大鼠β-TPS凍干標(biāo)準(zhǔn)品為一次性使用,不得分裝。因其濃度較低,溶解兩小時(shí)候后,會(huì)迅速失活。
5.操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
6.配制試劑時(shí),要用旋渦混合儀混勻。加入孔內(nèi)的試劑,充分混勻?qū)y試結(jié)果尤為重要, 使用微量振蕩器(使用低頻率),如無微量振蕩器,可在反應(yīng)前手工輕輕晃動(dòng)酶標(biāo)板1分鐘,例如做圓周動(dòng)作,使加入孔中的反應(yīng)液混勻。
7.實(shí)驗(yàn)用酶標(biāo)儀應(yīng)嚴(yán)格按使用說明書規(guī)范操作,并在使用前充分預(yù)熱。
8.酶免試驗(yàn)中大鼠β-TPS標(biāo)準(zhǔn)品和樣本檢測時(shí)建議作復(fù)孔。
9.將不用的微孔板放進(jìn)原鋁箔袋中,
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