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多克隆抗體具備哪些優(yōu)勢呢
更新時(shí)間:2022-02-23 點(diǎn)擊次數(shù):929次
多克隆抗體制備的主要流程包括:制備抗原;選擇實(shí)驗(yàn)動物;動物免疫;試取血進(jìn)行測試,看看是否成功免疫;如果成功免疫,處死實(shí)驗(yàn)動物,采集全部血清;純化出抗體;鑒定抗體,包括純度以及特異性。
與單抗制備的區(qū)別經(jīng)過特定抗原處理過的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞通過細(xì)胞融合的方法得到雜交瘤細(xì)胞,經(jīng)HAT培養(yǎng)基篩選、ELISA檢測效價(jià)后就得到陽性克隆株,Zui后進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)或?qū)⒓?xì)胞注入到動物腹腔中用腹水培養(yǎng),收集上清/腹水純化后就能得到單克隆抗體。而制備多克隆抗體就沒有單克隆抗體繁瑣,只需將抗原直接注入到動物體內(nèi)進(jìn)行免疫,經(jīng)過3至4次免疫,ELISA測其效價(jià)合格后,收集血液離心得到上清,純化后即能得到多克隆抗體。因此多抗制備的周期就比單抗制備的短,*制備價(jià)格也比單抗要低。
多克隆抗體是由免疫的宿主通過不同來源(多克隆)的B細(xì)胞分泌產(chǎn)生的抗體。一組多克隆抗體應(yīng)識別同一抗原,同時(shí)由于是多克隆,所以往往對同一抗原的多個(gè)不同表位進(jìn)行識別。
優(yōu)勢:
1、由于多克隆抗體具有多個(gè)表位結(jié)合位點(diǎn),可與靶蛋白的多個(gè)表位結(jié)合,所以,多克隆抗體有助于放大低表達(dá)水平的靶蛋白信號,但是,從結(jié)果的準(zhǔn)確性來說,這個(gè)優(yōu)勢也是劣勢,它會給定量實(shí)驗(yàn)造成不利影響,使結(jié)果變得不準(zhǔn)確。
2、由于能識別多個(gè)表位,多克隆抗體更適用于IP/ChIP實(shí)驗(yàn),可得到更好的結(jié)果。
3、制備生產(chǎn)時(shí)間短,所需技術(shù)和技能要求不高,成本比單克隆抗體低,穩(wěn)定性強(qiáng)。
4、雙抗夾心法ELISA中捕獲抗體選擇多克隆抗體,可以快速捕獲靶蛋白。