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如何進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清的滅活處理
更新時間:2021-09-24 點擊次數(shù):1137次
標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清通常在細(xì)胞培養(yǎng)中作為基礎(chǔ)生長培養(yǎng)基的添加劑。標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清是從適合人類衛(wèi)生習(xí)慣的農(nóng)場收集的。有時,也可能用其他的牛血清,如新生牛血清或者供體牛血清。在細(xì)胞培養(yǎng)中,血清供應(yīng)了豐富的高分子蛋白,低分子量營養(yǎng)物,疏水載體蛋白和其他體外細(xì)胞生長必要的成分如激素和粘附因子。同時,血清可以增加培養(yǎng)基的緩沖能力或中和有毒成分,起到保護(hù)細(xì)胞的作用。在細(xì)胞培養(yǎng)過程中是否選擇添加血清,主要根據(jù)基礎(chǔ)培養(yǎng)基化學(xué)成分,培養(yǎng)細(xì)胞的類型和培養(yǎng)體系而定。
如何進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清的滅活處理:
滅活過程中,會導(dǎo)致血清中某些成分被破壞,如氨基酸,維生素,生長因子等。所以只有在您的實驗對血清有特殊要求時,才會考慮對血清進(jìn)行滅活處理。如您的實驗對血清中的某種組分敏感,需要去除該組分。常見的情況是需要去除血清中的補(bǔ)體蛋白,因為補(bǔ)體在機(jī)體中參與細(xì)胞殺傷,巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞活化,肥大細(xì)胞和血小板組胺釋放,平滑肌收縮等過程,所以一般在免疫學(xué)相關(guān)研究中及肌細(xì)胞和干細(xì)胞的培養(yǎng)過程中需要對血清進(jìn)行滅活處理。
標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清先融化和混勻,熱滅活時請將血清置于56℃水浴30分鐘。為盡量減少熱滅活對血清品質(zhì)的影響,一次滅活的血清體積不宜過大。準(zhǔn)備同樣的容器裝相等體積的水(與血清相同溫度),滅活時將裝有血清和水的容器同時放入56℃水浴,在裝水的容器中放置溫度計,加熱過程中不時輕輕旋轉(zhuǎn)混勻血清,當(dāng)溫度計顯示達(dá)到56℃左右,開始計時。56℃水浴后,建議馬上轉(zhuǎn)移到冰上降溫。