首頁 >>>
技術文章 >>> 怎樣選擇適合你實驗需要的HRP標記抗體?
怎樣選擇適合你實驗需要的HRP標記抗體?
更新時間:2023-03-10 點擊次數:511次
HRP標記抗體由于性質和所使用的儲存條件不同,其存儲的“保質期”可能從幾周到幾年不等。一些診斷性抗體被證明經過12-26年在4°C的儲存能保持其功能。每個抗體存儲的最佳條件是不一樣的,然而我們還是可以總結抗體存儲的一些建議和一般準則。抗體的儲存時間取決于抗體固有的性質和儲存條件。抗體(尤其是酶)必須存放在適當的溫度和pH值范圍。
怎樣選擇適合你實驗需要的HRP標記抗體?
1.一抗選擇要點:
a.確定抗體的名字。注意中英文名字、它名、亞型等信息。
b.確定你的實驗類型。Elisa,WB,IHC,ICC,還是FACS。一般抗體的說明書都會列出該抗體經驗證過適用于何種實驗的類型,如果抗體說明書沒有提及的應用類型,并不意味著該抗體不適用于此種分析應用類型,而僅是說明尚未經過此種實驗驗證,請根據說明書列出的已驗證的類型來選擇適合你實驗的抗體。
c.確定實驗樣本的種屬。Human,Mouse,還是Rat。一般抗體說明書都列出該抗體經試驗驗證過適用于何種物種實驗,請根據說明書列出已驗證的種屬來選擇適合你實驗的抗體。
d.樣本蛋白的結構性質。了解樣本蛋白的結構性質有助于選擇最合適的抗體,待測樣本蛋白的結構域和樣本在提取和處理過程中是否會變性,蛋白空間構象的改變,會影響抗體的免疫親和反應。
e.HRP標記抗體的選擇。市面上的抗體還是以多克隆抗體為主,一般HRP標記抗體特異性強,但親和力相對小,檢測抗原靈敏度相對就低;而多克隆抗體特異性稍弱,但抗體的親和力強,靈敏度高,但易出現非特異性染色(可以通過封閉等避免)。
2.二抗選擇要點:
a.種屬來源。主要根據一抗種屬來源來決定購買二抗來源,如一抗是小鼠來源,那二抗就買抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。
b.標記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標記物。一般SP三步法二抗選擇Biotin標記的二抗,以與后面的SP結合反應,而免疫熒光染色就需要購買不同熒光素標記的二抗。